“大家应该都接触过‘蛋白印迹’实验了吧？”钱余向现场的同学们发问。

学生们分为了两派。一部分人高喊着“做过了”，一部分人则摇了摇头。因此，钱余首先给大伙简单回顾了课本知识。

“蛋白免疫印迹，也就是‘Western blot’——这是蛋白质的一种转移技术，将蛋白从凝胶中转移至‘印迹纸’上，再利用抗体显示该蛋白的存在。”

“我们通常口头称之为‘蛋白实验’，或者是‘跑蛋白’。”钱余力求讲解得通俗易懂，“整套实验操作包括了蛋白电泳、转膜、封闭、抗体孵育和显影。”

“简单来讲，就是先让蛋白质变性。然后利用电泳手段，将总蛋白按分子量大小，使其在电泳胶中进行分离。这就是SDS-PAGE——十二烷基硫酸钠–聚丙烯酰胺凝胶电泳。”

“紧接着利用电场作用，将胶上的蛋白条带，转移至印迹纸上——这是我们通常所说的‘转膜’。”

“转膜完成后，再对印迹纸进行‘封闭’。将膜上‘无蛋白’的部分进行填充，用来防止以下的两种抗体在这些空隙发生结合。”

“然后就到了‘抗体孵育’步骤——将该印迹纸孵育特定的蛋白抗体。这一抗体俗称‘一抗’，即‘第一抗体’，其必须与该蛋白发生特异结合。”

“由于‘一抗’通常不带标记，同时为了放大信号，我们会继续孵育配对‘一抗’的通用抗体‘二抗’，后者也俗称‘抗体的抗体’。”

“最后这一步就是‘显影’了——将蛋白条带变为我们肉眼可见的结果，考察目的蛋白的浓度。”

钱余讲的这则“小黑屋”的故事，就与“蛋白显影”有关。

“事实上，显影利用的是‘化学发光’。”

“原理其实也很简单——目前我们最常用的‘化学发光底物’是辣根过氧化物酶HRP。通用的商业抗体‘二抗’通常以HRP标记，当完成抗体孵育、进行显影之前，需要在印迹纸上加入‘化学发光液’——其中A液为‘鲁米诺’，B液为‘过氧化氢’。”

“现场如果有喜欢看侦探小说的同学，应该知道‘鲁米诺’的用处。”

钱余刚说完，下面就有学生举手抢答：“‘鲁米诺’是一种化学荧光分子，也称为‘发光氨’。在刑侦上，能够用来观察那些不显眼，或者时隔多年的‘血迹’。”

“看来这位同学有当侦探的潜质。”主持人适时地插了一句嘴。

“哈哈——”

大伙纷纷笑了起来。

“其实科学也可以像侦探小说，同样惊险刺激、引人入胜。”

钱余弯了弯嘴角，附和道：“这位同学说得没错——在蛋白显影实验中，利用的也是‘鲁米诺’的发光特性。”

“辣根过氧化物酶HRP作为催化剂，催化‘过氧化氢’分解，变为单氧分子和水——氧分子能使‘鲁米诺’氧化并发出蓝光。”

“操作过程也很简单——将A液与B液等体积混合，再与结合了HRP标记抗体的‘印迹纸’一起孵育。产生化学反应而生成的反射光，可通过‘X-光胶片’或者‘化学发光成像仪’进行图像采集。”

钱余问道：“现场做过蛋白显影的同学，请问你们用的什么方法观察图像呀？”

大伙普遍只给出了一种答案——化学发光成像仪。

钱余点了点头：“在425nm的条件下，仪器可检测‘鲁米诺’反射的蓝光。而且成像仪自带了‘CCD拍照成像系统’，还能连接电脑，运用配套软件进行图像采集，深受广大科研人员的喜爱。”

“在发光液作用的有效时限内，通过调整‘数字成像系统’的曝光时间梯度，可得出数张不同时间的蛋白曝光图，供科研人员随意选择并储存。若是曝光时间不理想，还能再次进行调整。只要化学发光作用尚未‘淬灭’，可以随时调整曝光时间，直到令你满意为止。”

“而且我们还能在系统软件上，直接进行蛋白‘定量分析’，十分方便。”

“这就是大家喜爱成像仪的原因了。”钱余继续说道，“可我刚开始做实验那会儿，实验室可没有条件买这个。我用的是最传统的显影方式——X-光胶片。”

“在大学的课本上，你们应该也读到过，用X-光胶片进行的蛋白显影方式吧？”

还是有不少记忆力好的学生，冲着台上的钱余点了点头。

“有没有用X-光胶片亲自做过显影操作的？”

这回倒是没有学生点头了。

“那你们有没有‘冲洗’过照片呀？”钱余又问道，“是旧时最传统的，用‘黑白胶卷’或者‘胶片’冲洗的那种照片。”